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定量PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)方法

瀏覽次數(shù):828發(fā)布日期:2022-10-27
  定量PCR檢測(cè)試劑盒常用于熒光免疫法中標(biāo)記抗原或抗體,亦可用于微環(huán)境,如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)等處微觀特性的探測(cè)。通常要求探針的摩爾吸光系數(shù)大,熒光量子產(chǎn)率高;熒光發(fā)射波長(zhǎng)處于長(zhǎng)波且有較大的斯托克斯位移;用于免疫分析時(shí),與抗原或抗體的結(jié)合不應(yīng)影響它們的活性。
 
  定量PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)方法:
 
  1.取增菌液1ml加到l.5ml無(wú)菌離心管中,10,000rpm離心5min,棄去上清;加入50ulDNA提取液,充分混勻后沸水浴5min,13000rpm離心5min,取上清液進(jìn)行檢測(cè)或保存于-20C以待檢測(cè)。
 
  2.將PCR反應(yīng)液置室溫平衡,融化后取Taq酶,按2U/管加入Taq酶,即每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制為:PCR反應(yīng)液22.5ul+0.4u1Taq酶。
 
  3.加入模板:將保存在-20C的核酸提取物置室溫解凍,以13000rpm離心5min。陰、陽(yáng)性對(duì)照使用前置室溫解凍。在每個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入步驟1中處理過(guò)的模板或陰、陽(yáng)性對(duì)照各2u1,蓋好管蓋,置于PCR儀上,記錄相應(yīng)樣品號(hào)。
 
  4.上機(jī)擴(kuò)增、檢測(cè)區(qū):反應(yīng)條件為95C:3min,1個(gè)循環(huán);95C:5sec,60C:40sec(信號(hào)采集),40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)體系設(shè)為25u1。對(duì)于多通道熒光PCR儀,信號(hào)采集時(shí)設(shè)定為Fam熒光素。
 
  定量PCR檢測(cè)試劑盒使用注意事項(xiàng):
 
  1.本試劑盒僅用于體外檢測(cè)和研究用途,開(kāi)始使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)全文。
 
  2.實(shí)驗(yàn)必須嚴(yán)格分區(qū)操作:PCR前準(zhǔn)備區(qū)一一準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)試劑;樣本處理區(qū)一一待測(cè)樣本、模板處理;檢測(cè)區(qū)一一PCR擴(kuò)增、檢測(cè)。
 
  3.有關(guān)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范請(qǐng)參照國(guó)家相關(guān)部門(mén)頒布的基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。
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